■ 基本信息
別名: | pRSFDuet1 |
啟動(dòng)子: | T7 |
復(fù)制子: | RSF |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸系列質(zhì)粒；大腸其它質(zhì)粒；大腸雙框質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 3829bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-6×His，C-S |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度，37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | BL21(DE3)等大腸桿菌 |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測(cè)序引物: | ACYCDuetUP1-F(GGATCTCGACGCTCTCCCT) DuetUP2-F( TTGTACACGGCCGCATAATC) |
3'測(cè)序引物:
| DuetDOWN1-R( GATTATGCGGCCGTGTACAA) T7-ter-R( TGCTAGTTATTGCTCAGCGG) |
備注: | 同時(shí)表達(dá)兩個(gè)外源蛋白 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類(lèi)型: | ORF
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片段物種: | 多框空載
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原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pRSFDuet-1質(zhì)粒是一種原核表達(dá)載體， N端含有一個(gè)6×His標(biāo)簽，C端含有一個(gè)S標(biāo)簽。該質(zhì)粒含有多個(gè)常用的酶切位點(diǎn)，便于不同基因克隆。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯信號(hào)控制。
該質(zhì)粒還攜帶有RSF復(fù)制因子、lacI基因和氯霉素抗性基因?？梢允惯@個(gè)pETDuet-1載體在一個(gè)適當(dāng)?shù)乃拗骶甑腸oexpression 4目標(biāo)基因插入MCS1的基因可以使用ACYCDuetUP1引物和DuetDOWN1引物進(jìn)行測(cè)序。插入MCS2的基因可以用DuetUP2引物和T7進(jìn)行排序。
pRSFDuet-1 is designed for the coexpression of two target ORFs. The vector contains two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7lac promoter and ribosome binding site (rbs). The vector also carries the RSF1030-derived RSF replicon, lacI gene and kanamycin resistance gene (KnR). This vector can be used in combination with pACYCDuet?-1 , pCDFDuet?-1 , and pETDuet?-1 in an appropriate host strain for the coexpression of 4 to 8 target proteins. ORFs inserted into MCS1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer . ORFs inserted into MCS2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer . Unique sites are shown on the circle map.
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1686 pRSFDuet-1大腸雙表達(dá)質(zhì)粒.txt
