■ 基本信息
別名: | pColdTF |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5769bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達(dá)宿主: | BL21等大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測(cè)序引物: | pCold-TF-F1（CCACTTTCAACGAGCTGATG） |
3'測(cè)序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
備注: | 冷啟動(dòng)表達(dá)質(zhì)粒 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類(lèi)型: | ORF
|
片段物種: | 空載體
|
原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
|
熒光標(biāo)記: |
|
■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
Takara的pCold TF載體是一種融合表達(dá)可溶性的標(biāo)簽"觸發(fā)因子（Trigger Factor,TF）伴侶"的冷休克載體。"觸發(fā)因子"（48KD）是原核核糖體相關(guān)的分子伴侶蛋白（48 kDa），有利于新表達(dá)的多肽的共翻譯折疊。正因?yàn)樗鼇?lái)源于大腸桿菌，保證了觸發(fā)因子能夠在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高表達(dá)。 pCold TF載體由CSPA啟動(dòng)子及其下游的序列組成，其下游序列主要包括包括5'非翻譯區(qū)（5'非編碼區(qū)），翻譯增強(qiáng)元件（TEE），His標(biāo)簽序列，多克隆位點(diǎn)（MCS）。Lac操縱子插入在CSPA啟動(dòng)子下游，以確保嚴(yán)格的表達(dá)調(diào)控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa識(shí)別位點(diǎn)位于“Trigger Factor”和多克隆位點(diǎn)（MCS）之間，以便表達(dá)的融合蛋白上將標(biāo)簽去除。 大多數(shù)大腸桿菌菌株都可以可以作為本載體的表達(dá)宿主。pCold TF載體提供冷休克誘導(dǎo)的方法高水平表達(dá)目的蛋白，再加上觸發(fā)因子（伴侶）的表達(dá)來(lái)提高正確的蛋白質(zhì)折疊，從而實(shí)現(xiàn)高效可溶性表達(dá)其他系統(tǒng)中難以對(duì)付的蛋白。
pColdTF質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在E.COLI啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE）,His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長(zhǎng)，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少，但是一類(lèi)稱(chēng)為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1592 pCold TF大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
