■ 產(chǎn)品介紹

菌株為大腸埃希菌，凍存管磁珠保存。

培養(yǎng)條件：營養(yǎng)瓊脂（AY103）、細菌保存培養(yǎng)基（AA836） 或胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（AY108）35℃ 24-48 小時，保存溫度：2-8℃。如需保存，則挑取單菌落接種至 細菌保存培養(yǎng)基斜面，每月轉(zhuǎn)接 1 次，5 代后應(yīng)銷毀。

■ 產(chǎn)品保存原理

凍存管里的小瓷珠表面多孔，細菌可以很方便的吸附在上面。凍存管接種上細菌后，可放置于-20℃或-80℃環(huán)境中長期保存（-20℃可保存一年，-80℃可保存二年）。當需要復(fù)蘇菌株時，可以很方便的從凍存管中取出單個的小瓷珠，直接接種到合適的細菌培養(yǎng)基上（平板培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基）。

■ 菌株復(fù)蘇

1、準備器材

相應(yīng)的細菌增菌培養(yǎng)基、試管、接種環(huán)、試管架、鑷子、酒精燈、酒精棉、記號筆等。

2、菌株復(fù)蘇需要再無菌的條件下進行，操作環(huán)境符合相關(guān)標準。

3、操作方法

3.1根據(jù)不同菌株的生長要求，配置相應(yīng)的增菌液，分裝試管中進行相應(yīng)增菌液的滅菌溫度進行滅菌，滅菌后在放置室溫備用。

3.2菌種管開啟方法：用浸過 75 ％酒精的脫脂棉擦凈菌種管；將菌種管頂端在火焰上加熱，注意避免直接加熱菌體或加熱過度。

3.3接種方式

3.3.1增菌肉湯的制備：取出凍存管并用力搖晃，使管內(nèi)瓷珠分散。無菌條件下擰開凍存管，用無菌的接種環(huán)（接種針）或鑷子取出1個小瓷珠，擰緊瓶蓋；將小瓷珠放置于滅菌后溫度在室溫的增菌液肉湯中。

3.3.2劃線接種：將手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約5 公分）燒至火紅，并不斷來回燒烤金屬固定桿之前約 10 公分，等待約10 秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，取出凍存管并用力搖晃，使管內(nèi)瓷珠分散。無菌條件下擰開凍存管，用無菌的接種環(huán)（接種針）取出1個小瓷珠或者菌液，擰緊瓶蓋；將小瓷珠在相應(yīng)的固體培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋1/3 培養(yǎng)基為止（I 區(qū)），灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自 I 區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域（II 區(qū)）， 重復(fù)的動作完成 III 區(qū)與 IV 區(qū)。灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。

3.4 盡可能快地將凍存管放回原來的保存環(huán)境，溫度過多改變將減弱細菌的生存能力；

3.5 培養(yǎng)箱中進行增菌肉湯及平板的培養(yǎng)根據(jù)細菌的要求培養(yǎng)：

  細菌要求在35+1℃培養(yǎng)，12~24小時；

  真菌要求在25+1℃培養(yǎng)，24~48小時；

  厭氧菌需要提供厭氧條件。

■ 菌株保存

1. 瓷珠保存法：

1.1 使用前，用油性筆在每個凍存管上標記上細菌的名稱，每支凍存管只可接種一種細菌；

1.2 在無菌條件下，打開凍存管的螺旋瓶蓋；

1.3 用接種環(huán)挑取18-24小時新鮮細菌純培養(yǎng)物，放入凍存液中。擰緊瓶蓋，來回顛倒使細菌乳化，配成大約3-4麥氏比濁度的菌懸液，此時細菌懸液會吸附在小瓷珠內(nèi)外表面；

1.4 用無菌移液器將凍存管中的菌懸液盡量吸出。（吸出的菌懸液應(yīng)放入消毒液中并隨后進行高壓滅菌處理）；

1.5 擰緊瓶蓋。記錄下接種細菌的詳細情況；

1.6 將接種完細菌的凍存管放在-20℃或-80℃冰箱中保存。

2、菌懸液保存法：

將復(fù)蘇好的試管的菌懸液，用滅菌好的甘油進行封存后放置冰箱2~8℃進行保存，保存時間為1個月。

3、斜面保存法：

將菌懸液用劃線方法進行斜面的接種培養(yǎng)后，用滅菌后的甘油進行保存放置冰箱2~8℃進行保存，保存時間為1個月。

■ 保存條件

1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫保存12個月；已經(jīng)接種的凍存管在-20℃可保存12個月或-80℃可保存24個月；接種三次后冷藏保存，不可再冷凍保存；

2、在接種之前有如下情況產(chǎn)生，該凍存管不得使用：

a.瓶子有漏液情況發(fā)生；

b.凍存管內(nèi)的凍存保護液混濁；

c.超過有效保存期。

3、小瓷珠一旦從凍存管中取出，不得再放回凍存管中；

4、當丟棄使用過的或部分使用過的凍存管時，應(yīng)注意生物危險的預(yù)防。

5、廢棄液經(jīng)高壓滅菌后（121℃，30分鐘）丟棄。

■ 備注

1、菌株來源中國醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心的菌株干粉，菌株干粉默認為零代，對干粉菌株進行復(fù)活為第一代菌株，第一代菌株進行傳代并保存為菌株的第二代即現(xiàn)在的磁珠。

2、菌株為第二代，保質(zhì)期6個月，如發(fā)現(xiàn)污染或不活等現(xiàn)象，請1個月內(nèi)聯(lián)系我公司。

3、菌株操作應(yīng)在無菌條件下進行，防止雜菌污染。

4、本方法僅供參考，視情況可以通過其他合理途徑進行傳代和保存。

5、本公司出售的菌株僅用于科研、教學及衛(wèi)生微生物檢驗質(zhì)量控制。