■ 產(chǎn)品介紹
DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞是用來(lái)生產(chǎn)用于真核細(xì)胞蛋白表達(dá)的重組桿狀病毒分子。 DH10Bac菌株含有父Bacmid的bMON14272和輔助質(zhì)粒pMON7124。父Bacmid的包含一個(gè)小型F復(fù)制子，卡鈉霉素抗性基因，attTn7重組位點(diǎn)和lacZα互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含的tnsABCD的區(qū)域,提供了轉(zhuǎn)座蛋白，這些轉(zhuǎn)座蛋白可以供體質(zhì)粒(Donor plasmid)上的小Tn7位點(diǎn)插入到父本Bacmid的重組目的位點(diǎn)。輔助質(zhì)粒pMON7124包含有四環(huán)素抗性(Tetracycline)。 DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞本身含有卡那霉素和四環(huán)素抗性。在制作感受態(tài)細(xì)胞的時(shí)候，需要加入這兩種抗生素，以防止DH10Bac中的質(zhì)粒父本桿粒bMON14272（卡那霉素抗性）和輔助質(zhì)粒pMON7124（四環(huán)素抗性）在細(xì)胞擴(kuò)增過(guò)程中丟失，提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的基因轉(zhuǎn)座效率。 |
基因型： | F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galKλ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 |
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
攜帶Tn7轉(zhuǎn)座元件的供體質(zhì)粒pFastBac，含有慶大霉素抗性基因，桿狀病毒多角體啟動(dòng)子，一個(gè)多克隆位點(diǎn)區(qū)域和SV40的poolyadenylation信號(hào)。重組的Bacmid分子通過(guò)將多克隆位點(diǎn)包含有基因編碼序列的供體質(zhì)粒pFastBa質(zhì)粒DH10Ba感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化與在編碼序列克隆到多個(gè)克隆網(wǎng)站（重組成功的質(zhì)粒在選擇性培養(yǎng)基平板上呈現(xiàn)為白色菌落）。然后可以將重組Bacmid進(jìn)行挑菌，小量提取分離并且轉(zhuǎn)染到昆蟲(chóng)細(xì)胞，從而進(jìn)行感染重組桿狀病毒顆粒生產(chǎn)。
高效DH10Ba感受態(tài)細(xì)胞的能夠有效抵抗連接酶和連接酶緩沖液，同時(shí)可以容忍少量未稀釋的連接反應(yīng)。φ80dlacZDM15標(biāo)記可以利用Bacmid載體中的β-半乳糖苷酶基因α-互補(bǔ)使用含X-gal平板培養(yǎng)基的藍(lán)白斑菌落篩選。
綜上所述，DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞本身含有卡那霉素和四環(huán)素抗性，而供體質(zhì)粒pFastbac含有慶大霉素的抗性，所以在制備DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞時(shí)需要在培養(yǎng)時(shí)添加卡那霉素和四環(huán)素，而在制備桿粒時(shí)需要使用卡那霉素，四環(huán)素，慶大霉素的三抗平板。
■ 使用方法
建議超凈臺(tái)內(nèi)劃線涂板，得到單克隆后再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗(yàn)室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時(shí)可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，菌株的活力會(huì)逐漸下降。
